O que são plasmídeos?

Plasmídeos são pequenos pedaços circulares de DNA que se replicam independentemente do cromossomo da célula hospedeira, têm importante papel como vetores de clonagem e são amplamente utilizados na biologia molecular. Nos micro-organismos, os plasmídeos têm funções adaptativas, já que podem garantir a sobrevivência de bactérias pela presença de genes de resistência a antibióticos, por exemplo.

Os primeiros plasmídeos utilizados em laboratório foram derivados de plasmídeos naturais encontrados em bactérias. Desde a sua descoberta, pesquisadores adicionaram muitas características aos plasmídeos para adequação a uma variedade de aplicações. Foram projetados para transportar até 10 quilobases de DNA e são facilmente isolados de micro-organismos por métodos laboratoriais.

Embora os plasmídeos se repliquem independentemente do DNA cromossômico, eles dependem de enzimas hospedeiras para catalisar a sua replicação. As DNA polimerases do hospedeiro ligam-se a uma sequência de origem de replica…

Meio IAL / Rugai

Após o isolamento das enterobactérias em placa de Petri, realiza-se a sua identificação através de provas bioquímicas, seguidas ou não de provas sorológicas. A série bioquímica é composta de doze provas analíticas, das quais algumas podem ser feitas em conjunto num único tubo de ensaio, e outras devem ser feitas separadamente. Essas provas verificam basicamente a presença de determinadas enzimas, emissão de gás e motilidade. A partir da comparação dos resultados de todas as provas, verifica-se o gênero bacteriano analisado.

O meio IAL / Rugai foi elaborado para triagem de enterobactérias e consiste de nove provas em apenas um tubo de ensaio: indol (tampa), fermentação da sacarose, fermentação da glicose, produção de gás, fenilalanina, uréia, H2S, lisina e motilidade. Baseado nestas provas é possível identificar as seguintes bactérias:

- E. coli
- Shigella
- Enterobacter
- Klebsiella
- Providencia spp.
- Morganella morganii
- Proteus
- Salmonella
- Citrobacter
- Serratia
- Vibrio
- Não fermentadoras


Inoculação: com o auxílio de um fio de platina, coletar a amostra da colônia a ser pesquisada e inocular através de picada até o fundo do tubo, realizando estrias na superfície do meio de Rugai. Incubar em estufa a 36°C por 24 horas.

O meio IAL tem a vantagem de ser prático para inoculação e de baixo custo. Sua desvantagem é a dificuldade de interpretação de tantas provas, exigindo muita experiência prévia com o meio. Este meio identifica os principais gêneros de enterobactérias, indicando a presença de bactérias não fermentadoras e Vibrios. Para caracterizar corretamente as espécies de Enterobacter, gênero Serratia, gênero e espécies de Pseudomonas há necessidade de realizar provas complementares.

Pelas limitações do poder discriminatório de gêneros e espécies de enterobactérias não se recomenda este meio como única opção na identificação de bactérias envolvidas em infecções hospitalares. Uma alternativa seria utilizar os resultados obtidos do meio IAL como triagem e adicionar os testes complementares, como Citrato e a fermentação da lactose verificada no crescimento em ágar Mac Conkey.

TABELA DE INTERPRETAÇÃO DAS PROVAS
(clique na imagem para ampliar)
Tabela de interpretação (Biomedicina Brasil).
 

Fonte: ANVISA